JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:45 min. • July 8th, 2025
Limfocyty T regulatorowe lub Treg to wyspecjalizowana subpopulacja limfocytów T, która wywiera działanie immunosupresyjne, pośrednicząc w homeostazie układu odpornościowego. Tregi wyrażają markery powierzchniowe komórek CD4, CD25 i neuropilinę 1, Nrp1 oraz jądrowe czynniki transkrypcyjne forkhead box P3, Foxp3 i Helios.
Aby wyizolować limfocyty Treg z węzłów chłonnych drenujących trzustkę myszy lub PDLN, umieść metalową siatkę na stożkowej rurce. Umieść PDLN na siatce i zmiel tkankę, aby mechanicznie ją zdysocjować. Dodać odpowiednie podłoże na siatkę, spłukując komórki do probówki.
Wirować, usuwając martwe komórki i resztki komórkowe. Ponownie zawiesić żywe komórki w pożywce. Przepuść komórki przez nasadkę sitka umieszczoną w probówce z okrągłym dnem, aby uzyskać jednorodną zawiesinę jednokomórkową, eliminując wszelkie pozostałe grudki komórek.
Dodaj przeciwciała anty-CD4, anty-CD25 i anty-Nrp1 sprzężone z fluorochromem. Przeciwciała anty-CD4 i anty-CD25 wiążą się z odpowiednimi antygenami na powierzchni komórki na limfocytach Treg. Jednocześnie anty-Nrp1 wiąże się z receptorami Nrp1.
Potraktuj komórki odpowiednim buforem utrwalającym przepuszczalność, utrwalającym komórki i przen
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych