JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:42 min. • July 8th, 2025
Pęcherzowe leukocyty wątrobowe, MH, znajdują się przylegające do ścian wyspecjalizowanych naczyń krwionośnych wątroby lub sinusoid, które są wyściełane komórkami śródbłonka. Leukocyty MH są rekrutowane do otaczającej tkanki w odpowiedzi na stan zapalny.
Aby zebrać leukocyty MH, zacznij od uśpionej myszy w pozycji leżącej. Naciąć jamę otrzewną i klatkę piersiową, odsłaniając kompleks wątroby i krążeniowo-oddechowy.
Przemieszcz jelita, aby odsłonić żyłę wrotną, która przenosi krew ze śledziony, przewodu pokarmowego i powiązanych z nim narządów do wątroby. Włóż igłę podłączoną do pompy perystaltycznej do żyły wrotnej.
Wypreparuj żyłę główną dolną - główne naczynie krwionośne przenoszące odtlenioną krew z wątroby do serca - aby zebrać perfuzat podczas perfuzji.
Perfuzja wątroby przez żyłę wrotną za pomocą buforu zawierającego antykoagulant o niskiej szybkości przepływu przez krótki czas. Ten krok pomaga usunąć krew z nieprzylegającymi komórkami z naczyń krwionośnych wątroby przez odpływ żyły głównej dolnej. Wyrzuć ten zanieczyszczony krwią perfuzat.
Teraz perfuzuj z większą szybkością przepływu. Wymuszona perfuzja przy zwiększonym przepływie i szybkości ścinania zakłóca adhezję między leukocytami MH a wewnętrzną wyściółką naczynia krwionośnego, odrywając w ten sposób leukocyty MH od ściany sinusoidalnej.
Zebrać i przenieść perfuzat zawierający leukocyty MH i inne komórki krwi do świeżej probówki. Wirówka. Zawiesić osad zawierający leukocyty MH do dalszej analizy.
Aby pobrać mysie leukocyty wątrobowe z marginesami, natychmiast po ustaniu oddychania użyj sterylnych nożyczek i kleszczyków do tkanek zęba, aby wykonać nacięcie brzucha w linii środkowej aż do wyrostka mieczykowatego. Następnie użyj kleszczy, aby podnieść mostek i ostrożnie przeciąć przeponę i klatkę piersiową po obu stronach.
Zacisnąć hemostat na mostku i złożyć klatkę piersiową rostrally, aby odsłonić kompleks krążeniowo-oddechowy. Przesuń jelita na zewnątrz jamy brzusznej na lewo od zwierzęcia, odsłaniając żyłę wrotną. Następnie podłącz igłę o rozmiarze 30 do pompy perystaltycznej i wprowadź ją do żyły wrotnej, rostralnie do żyły śledziony.
Przeciąć żyłę główną dolną powyżej przepony, aby umożliwić drenaż i zebranie perfuzatu z jamy klatki piersiowej. Następnie włącz pompę perystaltyczną z prędkością około 3 mililitrów na minutę i zbierz pierwsze mililitry zanieczyszczonego krwią perfuzatu z basenu klatki piersiowej. Po zebraniu 3 mililitrów wyłącz pompę.
Następnie, po wprowadzeniu igły motylkowej o rozmiarze 21 podłączonej do 10-mililitrowej strzykawki, należy ponownie zainicjować perfuzję z prędkością do 4 mililitrów na minutę, aż 10 mililitrów perfuzatu zostanie pobranych z jamy klatki piersiowej. Gdy wątroba zmieni kolor na jasnobrązowy, zakończ perfuzję. Następnie przenieś perfuzat do 15-mililitrowej probówki. Odwirować go, a następnie odessać supernatant.