JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:17 min. • July 8th, 2025
Aby wyizolować komórki NK lub komórki NK - wyspecjalizowane białe krwinki zaangażowane w odporność wrodzoną, zacznij od ludzkiej tkanki wątroby zawierającej różne populacje komórek, w tym komórki zawierające tłuszcz, erytrocyty, granulocyty, limfocyty i inne powiązane komórki uwięzione w bogatej w kolagen macierzy zewnątrzkomórkowej lub ECM.
Zmiel tkankę na małe kawałki i przenieś je do probówki zawierającej kolagenazę - enzym proteolityczny. Kolagenaza rozszczepia kolagen, rozrywa macierz i rozluźnia komórki związane z ECM.
Włóż rurkę do dysocjatora tkankowego. Ta mechaniczna dysocjacja dalej dezintegruje ECM, aby uwolnić luźno połączone komórki do roztworu. Przefiltrować zawartość, aby usunąć niestrawioną tkankę i fragmenty ECM oraz zebrać filtrat zawierający różne komórki.
Ponownie zawiesić komórki w buforze zawierającym poliwinylopirolidon lub kulki krzemionkowe pokryte PVP. Koraliki PVP selektywnie wiążą się z komórkami zawierającymi tłuszcz, skutecznie oddzielając je od reszty komórek.
Odwirować z małą prędkością, aby zagnieździć populację komórek; wyrzucić supernatant zawierający szczątki i komórki tłuszczowe związane z kulkami. Zawiesić ponownie osad i nałożyć zawiesinę kom
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych