Rozpoznawanie markerów CD ludzkich komórek zabójczych indukowanych cytokinami za pomocą cytometrii przepływowej

Komórki CIK indukowane cytokinami to heterogeniczne populacje komórek odpornościowych generowane ex vivo z hodowli komórek jednojądrzastych krwi obwodowej (PBMC) stymulowanych specyficznymi cytokinami i przeciwciałami monoklonalnymi. Komórki CIK obejmują populacje komórek, w tym komórki NK-T CD3 + CD56 +, limfocyty T CD3 + CD56 i komórki NK CD3-CD56 +.

Aby określić proporcję komórek CIK, zacznij od probówek zawierających zawiesinę komórek CIK pochodzącą z PBMC. Dodaj przeciwciała anty-CD3 i anty-CD56 sprzężone z różnymi fluoroforami i ich mieszaninę do wyznaczonych probówek. Dodaj przeciwciała kontrolne izotypu sprzężone z podobnymi fluoroforami jako przeciwciała specyficzne do innych probówek.

Znakowane fluorescencyjnie przeciwciała anty-CD3 i anty-CD56 rozpoznają i wiążą się z CD3 i CD56 eksprymowanymi odpowiednio w populacjach komórek CIK. Przeciwciała kontrolne izotypu nie mają swoistości dla antygenu docelowego, co ułatwia pomiary niespecyficznego sygnału tła.

Pipetuj komórki do okrągłodennych probówek z nasadkami sitkowymi, które pomagają w usuwaniu agregatów komórkowych. Załaduj probówki do karuzeli cytometru przepływowego. Podczas biegu każda komórka przechodzi przez kanał