Selektywna izolacja limfocytów T CD4 ⁺ Vδ1 ⁺ γδ z ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej

Limfocyty T γδ wyrażają receptory limfocytów T, TCR, składające się z łańcuchów gamma i delta o domenach zmiennych i stałych.

Limfocyty T CD4 + Vδ1 - subpopulacja limfocytów T γδ - wykazują współekspresję zmiennego łańcucha Vδ1 i koreceptora CD4. Komórki te migrują do tkanek objętych stanem zapalnym i różnicują się w funkcjonalnie dojrzałe limfocyty T αβ CD4 + lub CD8 + - pośrednicząc w odpowiedzi immunologicznej.

Aby wyizolować limfocyty T CD4 + Vδ1 + z ludzkich komórek jednojądrzastych krwi obwodowej, PBMC, ponownie zawieś komórki w buforze. Użyj odczynnika blokującego Fc, aby zablokować receptory Fc na powierzchni komórki i zapobiec wiązaniu niespecyficznych przeciwciał.

Dodać przeciwciała anty-Vδ1 sprzężone z fluoroforem FITC, które wiążą się z antygenami Vδ1 komórek T γδ. Inkubować z mikrokulkami magnetycznymi sprzężonymi z przeciwciałami anty-FITC, które przyłączają się do barwnika FITC na przeciwciałach związanych z komórkami T Vδ1.

Przepuścić mieszaninę przez kolumnę magnetyczną, aby przyciągnąć komórki T Vδ1+ związane z kulkami; limfocyty T Vδ1-T pozostają niezwiązane, a następnie są wypłukiwane. Na siłę przepłukać kolumnę, przepychając przez nią bufor, aby odłączyć limfoc