JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:49 min. • July 8th, 2025
Pułapki zewnątrzkomórkowe makrofagów, MET, to struktury przypominające sieć uwalniane przez makrofagi w celu wychwytywania i eliminowania patogenów.
MET zawierają zewnątrzkomórkowe włókna chromatyny związane z metaloproteinazą macierzy-9, MMP-9 i cytrulinowanym histonem H3, H3Cit - zmodyfikowanym białkiem histonowym, w którym arginina jest przekształcana w cytrulinę.
Aby scharakteryzować MET w utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie odcinkach mysiej tkanki płucnej, najpierw wysusz szkiełka. Zanurz w ksylenie, aby odparafinować sekcje. Użyj wodnego etanolu do nawodnienia sekcji.
Podgrzej sekcje, aby zerwać wiązania krzyżowe białek wywołane formaliną, odsłaniając docelowe antygeny do późniejszego wiązania przeciwciał.
Dodaj roztwór zawierający białko, aby zablokować niespecyficzne miejsca wiązania. Inkubować z koktajlem przeciwciał pierwszorzędowych anty-MMP-9, anty-H3Cit i anty-F4/80.
Przeciwciało anty-F4/80 wiąże się z glikoproteiną F4/80 na powierzchni komórki makrofaga. Przeciwciała anty-MMP-9 i anty-H3Cit wiążą się odpowiednio z MMP-9 i H3Cit w MET. Dodaj różne przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, które wiążą się z odpowiednimi przeciwciałami pierwszorzęd
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych