Izolacja mikrocząstek pochodzących z apoptotycznych limfocytów T in vitro

Mikrocząstki komórkowe to submikronowe pęcherzyki związane z błoną, które otaczają biomolekuły uwolnione z błony plazmatycznej komórek eukariotycznych ulegających apoptozie.

Aby wytworzyć mikrocząstki pochodzące z limfocytów T, LMP in vitro, należy pobrać kolbę hodowlaną zawierającą hodowlę limfocytów T. Dodaj aktynomycynę-D, antybiotyk. Inkubować przez odpowiedni czas.

Aktynomycyna-D dostaje się do limfocytów i przemieszcza się do jądra. Interkaluje między określonymi parami zasad DNA, hamując transkrypcję. Prowadzi to do zatrzymania cyklu komórkowego i aktywuje szlak apoptozy.

Na początku apoptozy aktywowana kaspaza-3 rozszczepia się i aktywuje kinazę związaną z rho, ROCK1. Z kolei ROCK1 fosforyluje swoje dalsze białka docelowe, powodując skurcz aktomiozyny, co prowadzi do pęcherzenia błony, a następnie uwalniania LMP zawierających składniki cytozolowe i jądrowe do pożywki.

Komórki w końcu ulegają apoptozie.

Po inkubacji przenieś pożywkę hodowlaną do świeżej probówki. Wirówka do osadzania limfocytów T. Przenieść supernatant do świeżej probówki.

Wirować w celu usunięcia dużych resztek komórek. Przenieść supernatant zawierający LMP do butelki. Wykonaj ultrawirowanie z dużą prędkośc