Technika izolowania pierwotnych komórek tucznych z mysiej jamy otrzewnowej

Komórki tuczne - białe krwinki zawierające ziarnistości cytoplazmatyczne wypełnione mediatorami stanu zapalnego - odgrywają główną rolę we wrodzonych i nabytych odpowiedziach immunologicznych.

Aby wyizolować komórki tuczne typu tkanki łącznej z jamy otrzewnej – wypełnionej płynem przestrzeni, w której znajdują się narządy jamy brzusznej – weź uśpioną mysz unieruchomioną w pozycji leżącej. Wykonaj podłużne nacięcie aż do mostka, odsłaniając ścianę brzucha.

Jama otrzewnej znajduje się pod ścianą jamy brzusznej, zawierającą płyn, który zawiera kilka komórek odpornościowych, w tym makrofagi, limfocyty, leukocyty wielojądrzaste i komórki tuczne.

Aby wyizolować komórki przez płukanie otrzewnowe - zasysanie treści dootrzewnowej - wstrzyknij lodowatą pożywkę wzrostową do jamy otrzewnej bez perforacji narządów, unikając wycieku krwi. Zimna pożywka pomaga utrzymać żywotność komórek.

Ostrożnie potrząsaj myszą przez odpowiedni czas, mieszając komórki odpornościowe z pożywką. Włożyć pustą strzykawkę do jamy. Powoli odsysaj pożywkę — odzyskując większość wstrzykniętego płynu w celu uzyskania lepszej wydajności komórkowej.

Przenieść zawiesinę komórek do probówki zbiorczej. Wirować w celu wytrącen