JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 3:51 min • July 8th, 2025
Neutrofile — komórki odpornościowe z wielopłatkowymi jądrami, regulują odporność tchawicy poprzez pochłanianie atakujących patogenów.
Aby oddzielić neutrofile od wydzieliny tchawicy, zacznij od spiralnego kanału mikroprzepływowego.
Kanał spiralny zaczyna się od centralnego wlotu, stopniowo wydłużając się i rozdzielając na wyloty ścian wewnętrznych i zewnętrznych. Kanał bifurkacyjny ma różną grubość, co zapewnia skuteczną separację. Każdy zakrzywiony kanał przypomina trapez, przy czym wysokość ścianki zewnętrznej jest większa niż ściana wewnętrzna, co generuje zmienny wzór przepływu.
Napełnij wlot wstępnie przefiltrowaną, rozcieńczoną ludzką wydzieliną tchawicy zawierającą agregaty mucyny, neutrofile i erytrocyty - jako przypadkowe zanieczyszczenia. Przepuść próbkę z określonym natężeniem przepływu przez spiralny mikrokanał, prowadząc do dyspersji komórek i agregatów.
Gdy komórki przemieszczają się przez kanał trapezowy, doświadczają oporu Deana i sił nośnych bezwładności. Wzajemne oddziaływanie tych dwóch sił tworzy równowagę, oddzielając komórki według ich rozmiarów. W rezultacie większe neutrofile gromadzą się w pobliżu wewnętrznej ściany kanału, podczas gdy erytrocyty i agregaty mucyny pozostają w pobliżu zewnętrznej ściany kanału.
Wreszcie neutrofile przemieszczają się przez szerszy kanał i gromadzą się w ujściu wewnętrznej ściany.
Natomiast wąski kanał gromadzi erytrocyty i agregaty mucyny w ujściu zewnętrznej ściany, zapewniając skuteczną separację neutrofili.
Użyj 10-mililitrowej strzykawki, aby zebrać 1 mililitr wydzieliny z dróg oddechowych próbki w 9 mililitrach soli fizjologicznej buforowanej fosforanami. Następnie za pomocą pipety homogenizować próbkę śluzu. Następnie użyj nylonowego sitka do komórek o średnicy 40 mikrometrów, aby odcedzić rozcieńczalnik i usunąć duże kawałki tkanki lub skrzepy krwi. Po zakończeniu odcedzania umieścić próbkę na lodzie.
Następnie dodaj 50 mililitrów soli fizjologicznej buforowanej fosforanem do 0,5-mililitrowego rozcieńczalnika do próbek, aby uzyskać końcowe stężenie 1,000 razy rozcieńczonej próbki. Użyj prowadnicy płynu, aby zmontować chip PDMS, aby zapewnić równomierny przepływ do każdego z czterech spiralnych mikrokanałów. Następnie użyj męskiego złącza luer o średnicy 1/16 cala, aby podłączyć do wlotu, wewnętrznego gniazdka ściennego i zewnętrznych portów wylotowych ściennych prowadnicy płynu.
Następnie podłącz silikonową rurkę do zawiesiny próbki. Następnie podłącz pompę perystaltyczną do rurki wlotowej. Umieść rurkę wylotową ze ściany zewnętrznej w zbiorniku na odpady. Następnie umieść koniec rurki doprowadzającej i rurkę wylotową ściany wewnętrznej w zbiorniku na próbkę.
Po umieszczeniu rurki pozostaw 50-mililitrową rurkę wypełnioną 5 mililitrami soli fizjologicznej buforowanej fosforanami bez wapnia i magnezu w zbiorniku na próbkę. Następnie, aby zalać urządzenie, rozpocznij pompowanie z natężeniem przepływu około 1 mililitra na minutę.
Po umieszczeniu próbki w zbiorniku na próbkę należy włączyć pompę perystaltyczną i ustawić natężenie przepływu na 4 mililitry na minutę. Gdy objętość próbki osiągnie żądaną objętość około 1 do 2 mililitrów, przerwij operację i odłącz rurkę.