Znakowanie mysich limfocytów T Helper za pomocą znakowanych radioaktywnie przeciwciał monoklonalnych

Aby znakować radioizotopowo mysi pomocnik T, limfocyty Th przenoszące receptor limfocytów T, TCR, specyficzny dla peptydu albuminy jaja kurzego, pobierają probówkę zawierającą znakowane radioaktywnie przeciwciała monoklonalne, mAb, o pożądanej aktywności radioaktywnej.

MAb zawiera mysi mAb specyficzny dla TCR wyrażony na błonie mysich limfocytów Th. Chelator sprzęga mAb i izotop miedzi emitujący pozytony, tworząc stabilny kompleks.

Rozcieńczyć znakowane radioaktywnie przeciwciała monoklonowe solą fizjologiczną. Następnie dodać rozcieńczone radioizotopowane mAb do wielodołkowej płytki zawierającej zawiesinę limfocytów Th. Krótko inkubować.

W hodowli znakowane radioaktywnie mAb wiążą się z TCR na błonach limfocytów Th. Po inkubacji przenieść zawiesinę komórkową do świeżej probówki.

wirówka. Odrzucić supernatant zawierający niezwiązane przeciwciała znakowane radioizotopem. Zawiesić limfocyty Th w pożywce i przenieść do płytki wielodołkowej. Inkubuj przez dłuższy czas.

Znakowane radioaktywnie wiązanie mAb-TCR powoduje rekrutację białka adaptorowego do cytoplazmatycznej strony błony plazmatycznej, z którą wiążą się triskeliony klatryny i tworzą dół pokryty klatryną.

Białka pomocnicze po