Technika in vitro do różnicowania komórek T pomocniczych wytwarzających GM-CSF od naiwnych limfocytów T

Czynnik stymulujący tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów, GM-CSF, jest wydzielany przez pomocnika T wytwarzającego GM-CSF lub komórki T_HGM. Komórki te wykazują niską ekspresję innych cytokin specyficznych dla limfocytów T pomocniczych.

Aby rozpocząć różnicowanie in vitro komórek T_HGM, należy wziąć zawiesinę limfocytów T pomocniczych - wyizolowaną ze śledziony myszy - zawierającą dojrzałe komórki aktywowane antygenem i niezróżnicowane komórki naiwne.

Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała skierowane do charakterystycznych markerów powierzchniowych naiwnych i dojrzałych komórek. Wykonaj sortowanie komórek aktywowane fluorescencją, aby wyizolować naiwne limfocyty T.

Umieść komórki w dołku pokrytym przeciwciałami, które wiążą się z kompleksem receptora limfocytów T. Dodaj przeciwciało, które wiąże się z receptorem kostymulującym. Synergiczne wiązanie aktywuje komórki.

Dodaj interleukinę 7 - cytokinę - indukując różnicowanie w komórkach_{T G}GM i produkcję GM-CSF. Dodaj octan mirystynianu forbolu, PMA - związek prozapalny, jonomycynę - jonofor wapnia i inhibitor transportu białek.

PMA dostaje się do komórki i aktywuje kinazę białkową. Przepuszczalna przez błonę jonomycyna prz