Identyfikacja inhibitorów kinaz, które modulują odpowiedź tymocytów na silne sygnały TCR
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:42 min. • July 8th, 2025
Zacznij od komórek tymocytów myszy na płytce wielodołkowej. Dodaj kulki magnetyczne pokryte przeciwciałami anty-CD3 i anty-CD28. Do podzbioru studzienek dodać odpowiednie stężenie inhibitora kinazy testowej. Inkubować.
Przeciwciała wiążą się z receptorami CD3 i CD28 na powierzchni komórki na podwójnie dodatnich tymocytach i aktywują je, powodując regulację w dół receptorów limfocytów T, TCR i aktywację cytozolowej kinazy białkowej.
Te kinazy białkowe aktywują dalsze szlaki sygnałowe, prowadząc do zwiększonej ekspresji CD69 na powierzchni komórki i aktywacji cytozolowej kaspazy-3. Aktywowana kaspaza-3 rozszczepia niezbędne białka komórkowe - inicjując apoptozę tymocytów.
W komórkach leczonych inhibitorem kinazy inhibitory blokują kinazy cytozolowe, modulując ekspresję CD69 i aktywację kaspazy-3.
Pipeta w znakowanym fluoroforem koktajlu przeciwciał, który wiąże się z koreceptorami TCR, CD4 i CD8 oraz receptorami CD69 tymocytów. Potraktuj tymocyty buforem, aby je utrwalić i przepuszczalnić.
Inkubować z przeciwciałem anty-kaspazy-3 znakowanym fluoroforem, które wiąże się z cytozolową kaspazą-3. Analizuj tymocyty za pomocą cytometrii przepływowej.
Podwójnie dodatnie tymocyty kontrolne e
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych