JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:47 min. • July 8th, 2025
Bakterie oznaczone opsoninami są rozpoznawane przez specyficzne receptory neutrofilowe, wywołując fagocytozę z reaktywnymi formami tlenu lub ROS, uwalnianiem i degradacją bakterii.
Aby określić ilościowo wytwarzanie ROS przez neutrofile in vitro, należy pobrać płytkę wielodołkową. Studzienka badawcza zawiera biofilm Staphylococcus aureus składający się z bakterii osadzonych w błonie macierzy zewnątrzkomórkowej. Studzienka kontrolna jest bez biofilmu.
Inkubuj biofilm z surowicą ludzką, pozwalając opsoninom surowicy na opsonizację biofilmu.
Odessać surowicę. Przemyć buforem, usuwając niezwiązane opsoniny. Dodaj do studzienek neutrofile i luminol - związek chemiluminescencyjny. Wirować, zbliżając neutrofile do biofilmu.
Za pomocą czytnika płytek zmierz luminescencję w czasie.
W studzience zawierającej biofilm neutrofile wiążą się z opsoninami biofilmu, powodując aktywację neutrofili i internalizację bakterii w fagosomach. Aktywowane są określone szlaki sygnałowe, powodując gromadzenie się oksydazy NADPH na fagosomach.
Oksydaza NADPH katalizuje przenoszenie elektronów z NADPH do tlenu cząsteczkowego, generując ROS, które rozkładają bakterie. Ponadto oksydaza NADPH na błonie komórkowej
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych