JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:21 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą kulturę makrofagów. Zakażenie bakterią Listeria monocytogenes wykazującą ekspresję białka fluorescencyjnego, Lm.
Białka na Lm wiążą się ze specyficznymi receptorami makrofagów, internalizując bakterie w fagosomie. Dodatkowo Lm wydziela toksyny tworzące pory, które zaburzają błonę fagosomu, uwalniając bakterie do cytozolu, gdzie replikują się i zostają otoczone przez włókna aktyny gospodarza.
Indukujące składanie aktyny białka ActA na Lm indukują ciągłą polimeryzację aktyny na tylnym końcu bakterii. Wygenerowany warkocz komety aktynowej napędza Lm przez cytozol i przenika do błony komórkowej makrofagów, uwalniając spolimeryzowany Lm otoczony aktyną do pożywki.
Po inkubacji zebrać i utrwalić zewnątrzkomórkowe, związane aktyną, zawierające Lm pożywki z zestawu studzienek. Napraw Lm za pomocą paraformaldehydu. Dodaj wodę destylowaną, rozrywając makrofagi i uwalniając wewnątrzkomórkowy Lm. Zebrać wewnątrzkomórkowy Lm i utrwalić próbkę za pomocą paraformaldehydu.
W innych studzienkach zastąp pożywkę nieprzepuszczalną dla komórek pożywką zawierającą gentamycynę, aby wyeliminować zewnątrzkomórkowy Lm. Zastąp nową pożywką i inkubuj przez żądany okres.
Po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych