JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:36 min. • July 8th, 2025
Aby zbadać odpowiedź immunologiczną Drosophila na drobnoustroje chorobotwórcze, weź zawiesinę żywotnych patogenów bakteryjnych. Zanurzyć jałową igłę w zawiesinie, zbierając niewielką ilość.
Umieść znieczuloną muchę pod mikroskopem preparacyjnym. Za pomocą zainfekowanej igły nakłuj muchę w płytkę mostkowo-opłucnową klatki piersiowej. Nakłucie wprowadza bakterie do hemolimfy – płynu krążącego w jamie ciała.
Umieść zakażone muchy w fiolce zawierającej pokarm dla much i utrzymuj je przez odpowiedni okres.
Bakterie wykorzystują hemolimfę jako bogate źródło składników odżywczych i namnażają się, co powoduje infekcję ogólnoustrojową. Hemolimfa zawiera hemocyty, krążące komórki efektorowe układu odpornościowego.
Hemolimfa jest również związana z ciałem tłuszczowym, wyspecjalizowaną tkanką do magazynowania energii. Receptory rozpoznawania wzorców na komórkach ciała tłuszczowego wchodzą w interakcję z bakteriami. Ta interakcja indukuje komórki do wydzielania peptydów przeciwdrobnoustrojowych, pośredniczących w zabijaniu bakterii.
Krążące hemocyty oddziałują z bakteriami za pośrednictwem receptorów fagocytarnych, powodując ich pochłanianie przez fagosomy i powodując degradację bakterii.
Podzbiór patogenów unika odpowiedzi immunologicznej gospodarza, co prowadzi do śmierci much.
Monitoruj śmiertelność much i przeprowadzaj dalsze testy, aby ocenić odpowiedź immunologiczną przeciwko patogenowi.
Aby przygotować wstrzykiwacz infekujący, stopić końcówkę końcówki mikropipety o pojemności 200 mikrolitrów i włożyć 0,15-milimetrową szpilkę do pomiaru owadów w stopiony plastik. Pozwól, aby plastik zastygł, tak aby szpilka była utrzymywana na miejscu za pomocą 0.5 centymetra szpilki wystającej z plastiku.
Znieczulij muchy dwutlenkiem węgla i nakłuj muchy w mostkową płytkę opłucnową klatki piersiowej igłą, unikając miejsc przyczepu skrzydeł i nóg. Usuń muchy z maleńkiej szpilki za pomocą miękkich kleszczy. Pamiętaj, aby zanurzyć szpilkę w zawiesinie bakteryjnej między nakłuwaniem każdej muchy.
Umieść ukłute muchy w nowym pilniku z nowym podłożem na muchy, kładąc fiolkę na boku, aż wszystkie muchy wyzdrowieją ze znieczulenia.