Pomiar obciążenia bakteryjnego E. coli u Drosophila melanogaster po zakażeniu E. coli

Zacznij od dorosłych much Drosophila melanogaster, którym wstrzyknięto E. coli. W pożądanych punktach czasowych po wstrzyknięciu przenieś znieczulone muchy do oddzielnych probówek mikrowirówek na lodzie, zmniejszając ich aktywność metaboliczną.

Dodaj bufor i homogenizuj muchy, rozkładając tkankę, uwalniając E. coli i endogenną mikrobiotę jelitową.

Przenieść każdy homogenat muchowy zawierający E. coli do wielodołkowych dołków płytkowych. Napełnij pozostałe studzienki buforem. Przeprowadzić seryjne rozcieńczanie homogenatu zawierającego E. coli.

Rozcieńczoną zawiesinę homogenatu z każdej studzienki wraz z dyskretnymi plamkami należy umieścić na płytce z agarem odżywczym, zaczynając od najniższego rozcieńczenia. Pozwól, aby plamy wchłonęły się w agar. Inkubuj płytkę przez noc, aby umożliwić namnażanie się E. coli, tworząc widoczne kolonie. Czas inkubacji ma kluczowe znaczenie dla zapobiegania tworzeniu się endogennych kolonii mikrobioty jelitowej muchy.

Policzyć kolonie E. coli dla każdej muchy z rozcieńczeń z policzalnymi, nienakładającymi się koloniami. Obliczyć jednostkę tworzącą kolonię - żywotne obciążenie bakteryjne - w początkowym homogenacie w różnych punktach czasowych po wst