JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:44 min. • July 8th, 2025
Aby wykryć aktywację inflamasomu receptora podobnego do NOD P3 lub NLRP3, weź płytkę wielodołkową zawierającą aktywowane makrofagi eksprymujące białka NLRP3.
Potraktuj komórki pożywką zawierającą jonofory i glicynę. Jonowory indukują wypływ jonów potasu, aktywując i oligomeryzując białka NLRP3. Oligomeryzowany NLRP3 rekrutuje białka adaptorowe, ułatwiając wiązanie pro-kaspazy-1, tworząc kompleks inflamasomu NLRP3.
Na inflamasomie, bliskość wyzwala auto-rozszczepienie pro-kaspazy-1, uwalniając aktywne kaspazy, inicjując piroptozę i kondensację jądrową. Dodatkowo glicyna stabilizuje strukturę komórkową, zapobiegając jej lizie.
Traktuj makrofagi fluorescencyjnymi sondami reporterowymi zawierającymi grupę wiążącą kaspazę-1 i fluorofor połączony sekwencją aminokwasów. Aktywowana kaspaza-1 rozpoznaje sekwencję aminokwasową sondy i wiąże się z jej grupą wiążącą kaspazę, umożliwiając jej wizualizację.
Napraw komórki i pokryj je barwnikiem fluorescencyjnym, aby zabarwić jądra. Obraz pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Policz makrofagi z niebieskimi skondensowanymi jądrami i zielonymi ogniskami fluorescencyjnymi aktywowanej kaspazy-1, co sugeruje aktywację inflamasomu NLRP3.
Zacznij od zastąpi
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych