JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:06 min. • July 8th, 2025
Zacznij od płytki zawierającej kulturę pierwotnych makrofagów.
Wprowadź bakteryjny lipopolisacharyd, LPS, który wiąże się z receptorami toll-podobnymi na makrofagach, wywołując regulację w górę białka z rodziny NLR zawierającego domenę piryny 3 lub NLRP3.
Dodaj jonofor, który pośredniczy w wypływie jonów potasu. Obniżony potas cytozolowy aktywuje NLRP3. Aktywowany NLRP3 oligomeryzuje i indukuje rekrutację białka adaptorowego, które z kolei rekrutuje pro-kaspazę-1, tworząc inflamasom.
Autoproteoliza przekształca pro-kaspazę-1 w aktywną kaspazę-1, która pośredniczy w zapalnej śmierci komórek lub piroptozie. Uszkodzenie DNA podczas piroptozy prowadzi do kondensacji jądrowej.
Napraw komórki i potraktuj detergentem, aby je przepuszczalności.
Dodaj przeciwciało pierwszorzędowe wiążące się z białkiem adaptorowym związanym z inflamasomem oraz znakowane fluorescencyjnie przeciwciało drugorzędowe, które wiąże się z przeciwciałem pierwotnym, znakując inflamasom.
Wprowadź fluorescencyjne barwienie kwasem nukleinowym, aby oznaczyć jądro. Pod mikroskopem fluorescencyjnym komórki wykazują skondensowane jądra - wskazujące na piroptozę - i ogniska białek adaptorowych - wskazujące na tworzenie się i
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych