JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:02 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę testową zawierającą makrofagi zagruntowane lipopolisacharydem.
Pobudzanie zwiększa ekspresję nieaktywnych prekursorów cytokin prozapalnych i białek NLRP3.
Dodaj nigerycynę, jonofor potasu, promujący wypływ jonów. To zaburza wewnątrzkomórkowy poziom potasu, wyzwalając białka NLRP3, tworząc duży kompleks.
Oligomeryzowany NLRP3 rekrutuje białka adaptorowe, ASC, powodując ich polimeryzację. Włókna ASC rekrutują pro-kaspazę-1, tworząc NLRP3-inflamasom, kompleks wielobiałkowy.
Pro-kaspaza-1 ulega autoaktywacji indukowanej bliskością, generując kaspazę-1. Kaspaza-1 rozszczepia cytokinę prozapalną i białko gasderminy-D, tworząc pory błony komórkowej.
Powoduje to wydzielanie cytokin i zapalną zaprogramowaną śmierć komórki, piroptozę, uwalnianie treści wewnątrzkomórkowej, w tym dehydrogenazy mleczanowej lub LDH. Zebrać supernatant zawierający LDH.
Dodaj mieszaninę substratów — mleczan, fiolet jodonitrotetrazolowy lub barwnik INT, NAD+ i diaforazę. LDH utlenia mleczan do pirogronianu, jednocześnie redukując NAD+. Diaphoza katalizuje redukcję INT, tworząc formazan o czerwonym zabarwieniu.
Intensywność koloru odpowiada uwalnianiu LDH, przy czym podwyższone poziomy wskazują na zwiększ
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych