JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:57 min. • July 8th, 2025
Weź szklaną probówkę zawierającą homogenat neutrofili z uwolnionymi składnikami wewnątrzkomórkowymi.
Dodaj metanol, rozpuszczalnik polarny, który zakłóca interakcje lipidowo-lipidowe i lipidowo-białkowe. Nieodłączna polarność metanolu równomiernie rozprowadza polarne lipidy, rozpuszczając je. Następnie dodaj chloroform, niepolarny rozpuszczalnik organiczny, który oddziałuje z niepolarnymi lipidami, powodując ich dyspersję i rozpuszczalność.
Odwirować w celu oddzielenia osadu zawierającego białko od supernatantu zawierającego lipidy, polisacharydy i szczątki komórkowe. Przenieść supernatant do świeżej szklanej probówki. Dodaj chloroform i wodę destylowaną. Odwirować próbkę.
Dodanie wody spontanicznie tworzy dwufazowy system, dzieląc biomolekuły w dolnej warstwie chloroformu i górnej warstwy woda-metanol.
Warstwa chloroformu składa się z rozpuszczonych lipidów niepolarnych, podczas gdy górna warstwa zawiera zanieczyszczenia nielipidowe i bardziej polarne lipidy. Usunąć górną warstwę woda-metanol bez naruszania warstwy zawierającej lipidy.
Użyj koncentratora próżniowego, aby usunąć rozpuszczalnik z lipidów. Przechowywać w niższych temperaturach do czasu dalszego użycia.
Aby wyizolować
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych