JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:25 min. • July 8th, 2025
Weź płytkę wielodołkową zawierającą makrofagi.
Dodać Cryptococcus neoformans do studzienek testowych, podczas gdy studzienki kontrolne zawierają tylko makrofagi.
Makrofagi fagocytozy grzyby w fagosomach.
Przemyć buforem w celu usunięcia grzybów niefagocytozowanych. Dodaj pożywkę bez antybiotyków. Inkubować.
Fagosom łączy się z lizosomem, tworząc fagolizosom. Grzyby modulują pH fagolizosomów i posiadają wewnętrzne mechanizmy przetrwania w trudnych warunkach fagolizosomalnych. Grzyby przenikają przez błonę fagolizosomalną i replikują się, czemu towarzyszy cytozolowe nagromadzenie pęcherzyków wypełnionych polisacharydami.
Wewnątrzkomórkowe przebywanie i replikacja grzybów powodują uszkodzenie komórek, uruchamiając szlaki śmierci komórki. Powoduje to lizę makrofagów i uwalnianie treści wewnątrzkomórkowej, w tym dehydrogenazy mleczanowej lub LDH, do pożywki.
Zbieraj pożywki zawierające LDH w różnych punktach czasowych. Poddaj lizie makrofagi kontrolne w podobnych punktach czasowych, aby uzyskać maksymalne uwalnianie LDH w komórkach. Dodać mieszaninę do oznaczania do pobranych pożywek i lizatów. LDH przekształca mleczan w pirogronian, redukując NAD+. Diaphoraza redukuje sól tetrazoliową,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych