System infekcji oparty na przepuszczalnej wkładce membranowej do badania wpływu toksyn bakteryjnych

Weźmy dwukomorowy system infekcyjny oddzielony przepuszczalną wkładką membranową. Dolna komora zawiera przylegające ludzkie keratynocyty lub komórki skóry.

Dodaj patogeny bakteryjne w górnej komorze i inkubuj. Błona zapobiega bezpośredniemu kontaktowi patogenów z keratynocytami. Patogeny wydzielają streptolizynę S lub SLS – małą toksynę – która przechodzi przez błonę, aby dotrzeć do komórek.

Kotransporter wodorowęglanu sodu na keratynocytach pośredniczy w napływie jonów wodorowęglanowych i sodu, utrzymując wewnątrzkomórkowe pH. SLS wiąże się z kotransporterem i zaburza transport jonów, prowadząc do wewnątrzkomórkowego stresu osmotycznego.

Sygnalizacja dalsza wywołana stresem powoduje degradację inhibitora związanego z sekwestrowanym czynnikiem jądrowym-Kappa B lub NF-κB, prowadząc do jego aktywacji. Aktywowany NF-κB przemieszcza się do jądra, prowadząc do zwiększenia produkcji cytokin prozapalnych.

Po wydzielaniu zewnątrzkomórkowym cytokiny wiążą się z receptorami śmierci na komórce gospodarza, inicjując martwicę. Po inkubacji należy zebrać supernatant hodowli, aby ocenić wpływ toksyny bakteryjnej.

Bezpośrednio przed zabiegiem należy użyć 1X PBS do przemycia komórek. Następnie nałó