JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:43 min. • July 8th, 2025
Weź komorę obrazowania zawierającą kulturę ludzkich komórek nabłonkowych załadowanych fluorescencyjnym wskaźnikiem wewnątrzkomórkowego wapnia.
Dodaj pożywkę wzrostową zawierającą jony wapnia. Wprowadź Shigella, bakterię chorobotwórcze, i wysiaduj.
System wydzielania bakteryjnego wnika do komórki gospodarza i uwalnia efektory inwazji. Inwazja wyzwala przegrupowanie aktyny, tworząc falbaczącą błonę wokół bakterii.
W miejscu inwazji aktywowana jest fosfolipaza C lub PLC na błonie plazmatycznej, a receptory trifosforanu inozytolu skupiają się na retikulum endoplazmatycznym lub ER.
PLC hydrolizuje 4,5-bisfosforan fosfatydyloinozytolu błonowego do trifosforanu inozytolu lub IP3, który gromadzi się lokalnie z powodu gęstej siatki aktyny.
IP3 wiąże się z receptorami na ER, powodując uwalnianie wapnia. Wskaźniki wapnia wiążą się z uwolnionymi jonami i emitują fluorescencję, wykazując lokalną odpowiedź wapniową.
IP3 powoli dyfunduje przez aktynę, dodatkowo obniżając poziom wapnia ER i aktywując kanał wapniowy błony komórkowej, co prowadzi do napływu wapnia .
Fluorescencja w całej komórce wskazuje na opóźnioną globalną odpowiedź wapnia.
Umieścić szkiełko nakrywkowe zawierające komórki Fluo-4
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych