Analiza synaps immunologicznych między ludzkimi limfocytami T a komórkami Raji załadowanymi SEB przy użyciu obrazowej cytometrii przepływowej
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:28 min. • July 8th, 2025
Weź probówki do cytometrii przepływowej zawierające niezaładowane komórki Rajiego i enterotoksynę B Staphylococcus aureus lub komórki Raji obciążone SEB.
Te załadowane SEB komórki Raji działają jako zastępcze komórki B prezentujące antygen zawierający superantygen SEB skompleksowany z cząsteczkami MHC klasy II.
Inkubować z pan-leukocytami.
Receptory limfocytów T, TCR na limfocytach T wiążą się z SEB na komórkach Raji, które wraz z sygnałami kostymulującymi tworzą stabilne połączenie komórka-komórka, synapsę immunologiczną, co prowadzi do aktywacji limfocytów T.
To uruchamia wewnątrzkomórkowe szlaki sygnałowe, powodując przegrupowanie cytoszkieletu aktyny, z grupowaniem cząsteczek sygnałowych i receptorów powierzchniowych w synapsie.
Po inkubacji napraw komórki, aby zachować ich struktury komórkowe. Przepuszczalność komórek w celu uzyskania dostępu do celów wewnątrzkomórkowych.
Dodaj znakowane fluoroforem przeciwciała anty-CD3, falloidynę i DAPI, które wiążą się z CD3 odpowiednio w kompleksie TCR, filamentach aktynowych i DNA.
Za pomocą obrazowego cytometru przepływowego wizualizuj sygnały fluorescencyjne z CD3 i aktyny, aby określić ich wzbogacenie w synapsie w obecności SEB.
Zaczn
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych