JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:41 min. • July 8th, 2025
Niektóre patogeny bakteryjne Gram-ujemne kontaktują się z komórkami gospodarza i wykorzystują systemy wydzielania do wstrzykiwania białek efektorowych, ułatwiając inwazję komórek.
Aby dostarczyć białka efektorowe do komórek ssaków in vitro, należy pipetować komórki ssaków do schłodzonej kuwety. Dodaj bakteryjne białka efektorowe znakowane peptydami wiążącymi streptawidynę i wymieszaj.
Wykonaj elektroporację. Podczas biegu krótkie impulsy elektryczne przerywają dwuwarstwę lipidową błony komórkowej gospodarza, tworząc przejściowe pory, ułatwiając wejście białek efektorowych do komórki. Umieść komórki na szklanej płytce zawierającej pożywkę, pozwalając komórkom odzyskać siły i przylgnąć do płytki. Pory ponownie się zamykają, zatrzymując białka w środku.
Po odzyskaniu komórek utrwal i przeniknij komórki, aby zapewnić dostęp przeciwciał do celów wewnątrzkomórkowych. Inkubować z roztworem blokującym zawierającym białko, aby zapobiec nieswoistemu wiązaniu przeciwciał. Dodaj przeciwciała pierwszorzędowe, które specyficznie wiążą się ze znacznikiem peptydowym wiążącym streptawidynę na wewnątrzkomórkowych białkach efektorowych.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, które
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych