JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:06 min. • July 8th, 2025
Zacznij od rozmrożonej kultury Mycobacterium bovis BCG lux, genetycznie zmodyfikowanego bioluminescencyjnego szczepu atenuowanego Mycobacterium bovis wykazującego ekspresję enzymu reporterowej lucyferazy.
Zaszczepić zawiesinę w kolbie hodowlanej zawierającej pożywkę wzrostową uzupełnioną higromycyną z antybiotykiem. Inkubować. BCG lux jest nosicielem genu oporności na higromycynę, co ułatwia jego przetrwanie i wzrost.
Po inkubacji przygotować odpowiednie rozcieńczenia kultur za pomocą buforu w probówkach z luminometrem. Przenieść do luminometru, obciążonego długołańcuchowym roztworem substratu aldehydu alifatycznego. Podczas biegu aldehyd jest wstrzykiwany do zawiesiny prątków, która dostaje się do komórek.
Lucyferazy bakteryjne katalizują utlenianie endogennego zredukowanego mononukleotydu flawinowego i aldehydu, powodując emisję światła niebiesko-zielonego. Zmierzona intensywność bioluminescencji wskazuje na aktywność metaboliczną luksów BCG i koreluje z miarą żywotnych bakterii lub jednostek tworzących kolonie, CFU.
Następnie odwiruj pozostałą kulturę prątków. Zawiesić osad prątków w buforze zawierającym niejonowy środek powierzchniowo czynny, aby zapobiec zbrylaniu się prątków.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych