JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:23 min. • July 8th, 2025
Aby zmierzyć obciążenie bakteryjne in vivo, zacznij od wysterylizowanych larw owadów wstępnie zakażonych Bacillus Calmette-Guérin lub BCG lux. BCG lux to genetycznie zmodyfikowany szczep Mycobacterium bovis BCG wykazujący ekspresję lucyferazy – enzymu wytwarzającego bioluminescencję.
Przenieś larwę owada do zawierającej bufor rurki z matrycą lizy za pomocą stalowych kulek. Za pomocą homogenizatora homogenizuj larwę, uwalniając składniki wewnątrzkomórkowe, w tym bakterie, do buforu.
Odwirować probówkę, aby zebrać homogenat i przenieść go do probówki z luminometrem.
Umyj probówkę matrycy buforem zawierającym detergent, aby rozpuścić fragmenty komórkowe i uwolnić resztki bakterii.
Połącz frakcje w tej samej probówce luminometru i dodaj substrat lucyferazy. Substraty wnikają w bakterie i wchodzą w interakcje z enzymami lucyferazy, powodując bioluminescencję. Załaduj rurkę do luminometru i zmierz bioluminescencję.
Luminometr mierzy natężenie emitowanego światła i oblicza względną jednostkę światła lub RLU — wskazującą na obciążenie in vivo BCG w larwie owada.
Rozcieńczoną zawiesinę homogenatu rozprowadzić na płytce agarowej zawierającej piperacylinę i inkubować w celu selektywnego wzros
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych