Kwantyfikacja obciążenia Helicobacter pylori w zakażonym żołądku myszy

Aby określić ilościowo kolonizację Helicobacter pylori w zakażonym żołądku myszy, zacznij od spłaszczonej tkanki żołądka zawierającej ciało i obszary antrum, zawieszonej w pożywce w celu wsparcia żywotności bakterii.

Homogenizuj, aby rozbić tkankę żołądka za pomocą warstwy śluzu, uwalniając Helicobacter pylori z tkanki do pożywki. Wykonaj seryjne rozcieńczenia powstałego homogenatu żołądkowego za pomocą pożywki.

Uzyskaj suszony agar z krwią końską, HBA, płytki podzielone na wiele segmentów. Płytki HBA są uzupełnione mieszaniną antybiotyków. Przenieść każde rozcieńczenie homogenatu na oddzielne segmenty płytki i równomiernie rozprowadzić.

Po suszeniu umieść płytki w pozycji odwróconej w nawilżonym słoiku do kultur beztlenowych ze specjalistycznymi mieszankami gazów. Inkubować.

Środowisko mikroaerofilne zapewniane przez słoik z kulturą beztlenową w połączeniu ze składnikami odżywczymi HBA ułatwia Helicobacter pylori wzrost i tworzenie kolonii. Antybiotyki zawarte w HBA hamują rozwój gatunków bakterii z endogennej mikrobioty żołądka.

Policz kolonie Helicobacter pylori na segmentach płytki HBA mieszczących się w określonym policzalnym zakresie.

Oblicz obciążenie Helicobacter pylori w tkance żołądka, wskazując stopień kolonizacji bakteryjnej w tkance.

Aby policzyć liczbę żywotnych H. pylori w żołądku po zakażeniu, homogenizuj próbki żołądka przechowywane w BHI i wykonaj zduplikowane seryjne rozcieńczenia powstałych homogenatów żołądkowych w świeżym sterylnym bulionie.

Podzielić wstępnie wysuszony agar z krwią końską lub płytki HBA, uzupełnione dodatkowymi antybiotykami, na trzy lub cztery segmenty i stosując adaptację techniki Milesa i Misry, dodać od 10 do 100 mikrolitrów każdego rozcieńczenia homogenatu żołądka na segment każdej płytki agarowej. Rozprowadzić homogenaty za pomocą sterylnych plastikowych pętelek i pozostawić płytki do wyschnięcia. Następnie umieść płytki w odwróconej pozycji w beztlenowych słoikach na gaz zawierających szalkę Petriego z wodą i pakiet gazowy, a następnie inkubuj słoiki w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez cztery do siedmiu dni.

Gdy można zaobserwować kolonie, wylicz segmenty zawierające od 10 do 100 izolowanych kolonii.