JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:43 min. • July 8th, 2025
Aby określić ilościowo infiltrację komórek odpornościowych w uropatogennej tkance pęcherza myszy zakażonej E. coli, należy umieścić zmieloną tkankę w buforze trawiennym zawierającym kolagenazę i dezoksyrybonukleazę.
Inkubować z regularnym potrząsaniem, aby rozbić tkankę.
Kolagenaza trawi macierz zewnątrzkomórkową tkanki, uwalniając komórki. Deoksyrybonukleaza rozkłada interferujące wolne DNA.
Po inkubacji dodać bufor ze środkiem chelatującym i płodową surowicę bydlęcą, aby dezaktywować enzymy trawienne.
Przepuszczoną mieszaninę przepuścić przez sitko w celu usunięcia resztek tkanki i tkanki łącznej, uzyskując zawiesinę jednokomórkową.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w buforze zawierającym przeciwciała blokujące Fc. Przeciwciała te wiążą się z receptorami Fc komórek odpornościowych, aby zapobiec wiązaniu przeciwciał nieswoistych.
Dodaj znakowane fluoroforem przeciwciała anty-CD45, które wiążą się z transbłonowym białkiem CD45 na komórkach odpornościowych.
Odwirować i przepuścić zawieszone komórki przez sitko komórkowe w celu usunięcia agregatów komórkowych.
Za pomocą cytometru przepływowego zmierz sygnały fluorescencyjne z przeciwciał sprzężonych z fluoroforem na komórkach odp
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych