JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:56 min. • July 8th, 2025
Weźmy na przykład hodowlę ludzkich komórek raka wątroby, genetycznie zmodyfikowaną w celu ekspresji polipeptydu kotransportującego taurocholan sodu lub NTCP - receptora transbłonowego.
Dodać rekombinowany wirus zapalenia wątroby typu B lub HBV. Wirus składa się z zewnętrznej otoczki zawierającej białka powierzchniowe i wewnętrznego nukleokapsydu otaczającego genom. Wprowadzenie genu reporterowego lucyferazy hamuje zdolność reprodukcyjną wirusa.
Białko otoczki wirusa wiąże się z receptorem NTCP komórki gospodarza.
NTCP oddziałuje z receptorem naskórkowego czynnika wzrostu, EGFR, i oligomeryzuje, indukując endocytozę wirusa za pośrednictwem EGFR.
Otoczka wirusowa łączy się z błoną endosomu, aby uwolnić nukleokapsyd, który rozpada się w kompleksie porów jądrowych.
Genom wirusa dostaje się do jądra i przekształca się w kowalencyjnie zamknięty kolisty DNA lub cccDNA - stabilną matrycę - kodującą białka wirusa, w tym lucyferazę.
W określonych odstępach czasu zbieraj komórki i poddawaj lizie, aby uwolnić wewnątrzkomórkową lucyferazę.
Wprowadź podłoże reporterowe. Lucyferazy utlenia substrat, wytwarzając sygnał.
Wzrost aktywności lucyferazy po zakażeniu wskazuje na ciągłą ekspresję genomu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych