JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 3:03 min • August 20th, 2025
Weźmy szczura uprzednio uodpornionego emulsją z adiuwantem antygenu zawierającą autoantygeny pochodzące z gruczołów łzowych i obce antygeny.
Ponownie wstrzyknąć emulsję i dootrzewnowo wstrzyknąć toksynę krztuścową, zapewniając maksymalną aktywację limfocytów T.
Aktywowane komórki różnicują się w krążące efektorowe limfocyty T pamięci, TEM i rezydujące w tkankach limfocyty T pamięci, TRM. Pewien procent TRM znajduje się w tkankach powierzchni oka.
Po upływie określonego czasu wstrzyknąć antygeny do otworu podspojówkowego i gruczołów łzowych, wywołując miejscowy stan zapalny.
Komórki prezentujące antygen podspojówkowy, APC, prezentują antygeny TRM, wyzwalając uwalnianie cytokin.
Cytokiny indukują komórki nabłonka spojówek do uwalniania chemokin, które rekrutują TEM.
APC reaktywują infiltrowane TEMs, wywołując uwalnianie cytokin prozapalnych.
Cytokiny powodują śmierć komórek kubkowych spojówek wytwarzających mucynę, obniżając poziom mucyny i powodując niestabilność filmu łzowego.
Cytokiny indukują śmierć komórek gruczołów łzowych – zmniejszając produkcję łez – i stymulują komórki nabłonka rogówki do produkcji metaloproteinaz macierzy, uszkadzając rogówkę.
Oceń szczura pod kątem cech klinicznych wskazujących na udaną indukcję suchego oka.
W dniu zerowym rozprowadzić 200 mikrolitrów emulsji, która zawiera 1 miligram ekstraktu z gruczołów łzowych i 200 mikrogramów albuminy jaja kurzego, a następnie uzupełnić adiuwant Freunda do 1-mililitrowych strzykawek Luer-lock i wyposażyć strzykawki w igły o rozmiarze 27.
Bez użycia znieczulenia wstrzyknąć podskórnie emulsję u podstawy ogonów szczura. Następnie, w dniu 14 w podobny sposób, wstrzyknij 200 mikrolitrów tego samego antygenu i niekompletnego adiuwantu Freunda. Tego samego dnia wstrzyknąć dootrzewnowo 300 nanogramów toksyny krztuścowej w 100 mikrolitrach PBS.
W 48 dniu zważ wymaganą ilość albuminy jaja kurzego i rozpuść ją w PBS, a następnie połącz albuminę jaja kurzego z rozmrożonym ekstraktem gruczołu łzowego przygotowanym wcześniej w tym filmie, tworząc roztwór antygenu zawierający 1 miligram na mililitr albuminy jaja kurzego i 1 miligram na mililitr ekstraktu z gruczołu łzowego.
Po znieczuleniu szczurów wstrzyknij 5 mikrolitrów antygenu do spojówki ogonowej oka, a następnie wstrzyknij 20 mikrolitrów antygenu do gruczołu łzowego.