JoVE Encyclopedia of Experiments
Immunologia
0 wyświetleń • 2:45 min • July 8th, 2025
Weź emulsję adiuwantową zawierającą glikoproteiny oligodendrocytów mieliny lub MOG - białko osłonki mielinowej nerwu i inaktywowane prątki gruźlicy. Wstrzykiwać go podskórnie w grzbiet myszy.
Następnie dootrzewnowo wstrzykuje egzotoksyny pochodzące z bakterii - zaburzając barierę krew-mózg.
Podskórnie wstrzyknięty Mycobacterium naśladuje miejscową infekcję, przyciągając komórki odpornościowe, w tym komórki prezentujące antygen lub APC.
Transportery opancerzone oddziałują z MOG, przetwarzając je i prezentując w głównych kompleksach zgodności tkankowej, MHC.
Aktywowane APC migrują do węzłów chłonnych, gdzie limfocyty T oddziałują z APC, stając się autoreaktywnymi limfocytami T.
Te limfocyty T dostają się do krwiobiegu, przekraczają barierę i infiltrują ośrodkowy układ nerwowy, OUN.
W OUN autoreaktywne limfocyty T oddziałują z komórkami wykazującymi ekspresję MOG, sprzyjając infiltracji komórek odpornościowych.
Naciekające monocyty różnicują się w makrofagi, uwalniając cytokiny zapalne i reaktywne formy tlenu, powodując śmierć komórek oligodendrocytów wytwarzających mielinę.
Limfocyty B oddziałują z autoreaktywnymi limfocytami T, różnicując się w komórki plazmatyczne i wydzielając autoprzeciwciała przeciwko MOG, co prowadzi do degradacji osłonki mielinowej.
Demielinizacja upośledza przekazywanie sygnałów nerwowych, wywołując autoimmunologiczne zapalenie mózgu i rdzenia.
Zacznij od podskórnego wstrzyknięcia 10-13-tygodniowym samicom myszy 200 mikrogramów glikoproteiny mielinowej oligodendrocytów, zemulgowanej w 200 mikrolitrach kompletnego adiuwanta Freunda zawierającego 400 mikrogramów Mycobacterium tuberculosis. Natychmiast i 24 godziny później wstrzyknąć myszom dootrzewnowo 0,2 mikrograma toksyny krztuścowej w 200 mikrolitrach PBS.
Istotne jest, aby myszy zostały przystosowane zarówno do obsługi, jak i środowiska eksperymentalnego przed indukcją, aby uniknąć wywoływania stresu, który może zapobiec rozwojowi objawów klinicznych.
Tydzień po wstrzyknięciu należy codziennie badać myszy pod kątem objawów klinicznych, jak opisano w tabeli.