JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:53 min. • July 8th, 2025
Na początek weź probówkę zawierającą komórki rakowe w pożywce bez surowicy, aby zminimalizować interferencję esterazy surowicy podczas testu. Inkubować z niefluorescencyjnym barwnikiem kalceiny AM.
Aktywne esterazy wewnątrzkomórkowe hydrolizują kalceinę AM do nieprzepuszczalnego dla błony fluorescencyjnego barwnika kalceinowego zatrzymanego w cytoplazmie.
Płytki barwione kalceiną komórki rakowe i efektorowe komórki NK w dołkach testowych, podczas gdy studzienki kontrolne zawierają tylko komórki rakowe barwione kalceiną bez komórek NK.
Receptory powierzchniowe komórek NK aktywujące wiążą się z aktywującymi ligandami na komórkach nowotworowych, tworząc synapsę immunologiczną. To wiązanie aktywuje sygnalizację komórkową NK, polaryzując cytotoksyczne granulki zawierające perforyny i granzymy w kierunku synapsy w celu uwolnienia.
Perforyny tworzą pory błony komórkowej raka, ułatwiając wnikanie granzym do komórek i inicjując apoptozę. Naruszona integralność błony powoduje fluorescencyjny wyciek kalceiny, zmniejszając fluorescencję komórek rakowych.
Uchwyć obrazy fluorescencyjne studni.
Zmniejszona liczba fluorescencyjnych żywych komórek rakowych w studzienkach zawierających komórki NK ni
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych