JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:36 min. • July 8th, 2025
Efferocytoza to proces, w którym komórki fagocytarne usuwają komórki apoptotyczne.
Aby przeanalizować eferocytozę, uzyskaj mysie tymocyty podatne na apoptozę. Inkubować z przepuszczalnym dla komórek barwnikiem CFSE.
Wewnątrzkomórkowe esterazy rozszczepiają CFSE na nieprzepuszczalny dla komórek barwnik fluorescencyjny, barwiąc tymocyty. Dodaj serum inaktywowane termicznie, aby zapobiec nadmiernemu przebarwieniu.
Umieść wybarwione tymocyty na płytce hodowlanej. Dodaj staurosporynę, inhibitor kinazy białkowej, który zakłóca krytyczną kaskadę sygnalizacji komórkowej, indukując apoptozę. Co więcej, reszty fosfatydyloseryny przemieszczają się do zewnętrznego płatka błony komórkowej, działając jako "sygnały zjadaj mnie".
Dodaj rosnące apoptotyczne stężenia tymocytów do wielodołkowych studzienek płytkowych zawierających aktywowane mysie makrofagi otrzewnowe, które wyrażają specyficzne receptorowe kinazy tyrozynowe.
Kinazy te wiążą eksponowaną fosfatydyloserynę z apoptotycznymi tymocytami, ułatwiając ich internalizację przez makrofagi.
Po inkubacji usuń swobodnie pływające apoptotyczne tymocyty. Dodaj znakowane fluoroforem przeciwciała anty-CD11b, które wiążą się z cząsteczkami makrofagów C
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych