Test cytotoksyczności PMN za pośrednictwem białek zewnątrzkomórkowych bakterii

Weźmy hodowlę Staphylococcus aureus, patogennej bakterii, która wydziela leukocydynę - toksynę tworzącą pory - składającą się z monomerycznych składników S i F.

Umieść komórki w granulkach i seryjnie rozcieńcz supernatant. Przenieść supernatant zawierający leukocydynę do mikropłytki zawierającej leukocyty wielojądrzaste lub PMN i inkubować.

Składnik S wiąże się ze specyficznymi receptorami transbłonowymi na PMN, po czym następuje heterooligomeryzacja ze składnikiem F, aby wprowadzić go do błony komórkowej, co powoduje tworzenie się porów.

Por powoduje zmniejszenie wewnątrzkomórkowych jonów potasu, aktywując rodzinę NLR zawierającą domenę piryny 3 lub białko NLRP3.

NLRP3 wiąże się z białkiem podobnym do plamki związanym z apoptozą, zawierającym domenę rekrutacyjną kaspazy lub ASC, która rekrutuje pro-kaspazę-1, tworząc inflamasom.

Autoproteoliza przekształca pro-kaspazę-1 w aktywną kaspazę-1, wywołując śmierć komórki.

Zbieraj komórki w określonych odstępach czasu. Dodaj jodek propidyny lub PI, który wnika do martwych komórek przez uszkodzone błony, aby związać DNA, emitując fluorescencję.

Korzystając z cytometrii przepływowej, określ ilościowo komórki barwione PI, aby ocenić cytotok