JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:28 min. • July 8th, 2025
Zacznij od hodowli komórek śródbłonka.
Zastąp pożywkę pożywką beztlenową. Inkubować w komorze beztlenowej w celu wyrównania temperatury.
Dodaj Porphyromonas gingivalis, chorobotwórczą bakterię beztlenową, i krótko inkubuj.
Bakterie posiadają wypustki białkowe, znane jako fimbrie, które wiążą się ze specyficznymi cząsteczkami adhezyjnymi na komórkach śródbłonka, ułatwiając przyleganie bakterii.
To wiązanie wyzwala wewnątrzkomórkowe kaskady sygnalizacyjne, powodując przegrupowanie cytoszkieletu aktynowego i internalizację bakterii w fagosomy.
Po inkubacji usuń pożywkę. Przemyć buforem beztlenowym w celu usunięcia nieprzylegających bakterii zewnątrzkomórkowych.
Dodaj łagodny detergent, aby przeniknąć przez błony komórkowe gospodarza i wywołać lizę komórek, uwalniając zinternalizowane i przyczepione do powierzchni bakterie bez powodowania uszkodzeń.
Rozcieńczyć bakterie zawierające lizat pożywką i przygotować seryjne rozcieńczenia.
Umieść te rozcieńczenia na płytkach z agarem z krwią. Inkubować w warunkach beztlenowych, aby umożliwić Porphyromonas gingivalis namnażanie się i tworzenie kolonii.
Po inkubacji policz jednostki tworzące kolonie (CFU) na każdej płytce, aby określić ilościowo
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych