JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:19 min. • July 8th, 2025
Zacznij od zawiesiny aktywnie rosnących Porphyromonas gingivalis, beztlenowych bakterii chorobotwórczych.
Dodaj BCECF-AM, niefluorescencyjny, przepuszczalny dla komórek barwnik.
Aktywne esterazy cytoplazmatyczne hydrolizują barwnik do fluorescencyjnej, nieprzepuszczalnej dla komórek formy, barwiąc bakterie.
wirówka. Ponownie zawiesić bakterie w podłożach beztlenowych.
Dodaj oznakowane bakterie do studzienek wielodołkowych zawierających szkiełka nakrywkowe z przylegającymi ludzkimi komórkami śródbłonka.
Inkubować w komorze beztlenowej.
Fimbie bakteryjne wiążą się z receptorami powierzchni komórek śródbłonka, inicjując wewnątrzkomórkowe kaskady sygnalizacyjne.
Prowadzi to do przegrupowania aktyny i internalizacji bakterii w fagosomach.
Po inkubacji umyj szkiełka nakrywkowe buforem w celu usunięcia niezinternalizowanych bakterii.
Utrwal komórki za pomocą paraformaldehydu, aby zachować struktury komórkowe. Przepuszczalność komórek za pomocą niejonowego detergentu, aby uzyskać dostęp do celów wewnątrzkomórkowych.
Dodaj znakowaną fluorescencyjnie falloidynę, która wiąże się z włóknami aktyny.
Umieść szkiełko nakrywkowe na podłożu montażowym zawierającym DAPI, które barwi DNA.
Obserwuj fl
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych