Ocena zinternalizowanego Porphyromonas gingivalis w komórkach śródbłonka gospodarza
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 2:37 min. • July 8th, 2025
Podczas zakażenia Porphyromonas gingivalis fimbrie bakterii beztlenowych wiążą się ze specyficznymi receptorami na komórkach gospodarza.
To wiązanie inicjuje wewnątrzkomórkowe kaskady sygnalizacyjne, powodując przegrupowanie aktyny i internalizację bakterii w fagosomach.
Aby ocenić przeżywalność zinternalizowanego Porphyromonas gingivalis w komórkach śródbłonka in vitro, należy pobrać płytkę wielodołkową zawierającą komórki śródbłonka przylegające do szkiełek nakrywkowych.
Dodać zawiesinę Porphyromonas gingivalis. Inkubować, aby ułatwić internalizację bakterii.
Usuń pożywkę i umyj za pomocą buforu beztlenowego w celu usunięcia nieinternalizowanych bakterii.
Dodaj pożywkę zawierającą antybiotyki, nieprzepuszczalne dla komórek śródbłonka, aby wyeliminować bakterie przyczepione do powierzchni.
Inkubuj z łagodnym środkiem powierzchniowo czynnym, aby lizować komórki śródbłonka, uwalniając bakterie bez powodowania ich lizy.
Rozcieńczyć zebrany lizat pożywką. Przygotować seryjne rozcieńczenia lizatu.
Rozcieńczenia rozcieńczyć na płytkach z agarem z krwią. Inkubuj w warunkach beztlenowych, aby Porphyromonas gingivalis mógł rosnąć i tworzyć widoczne kolonie.
Policz kolonie, aby ocenić zdoln
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych