JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:18 min. • July 8th, 2025
Zacznij od przylegających subpopulacji makrofagów M1 i M2, wyróżniających się specyficznymi markerami powierzchniowymi. Komórki te są zakażone znakowaną fluorescencyjnie prątką prątków gruźlicy.
Dodaj bufor FACS do studzienek hodowlanych.
EDTA w buforze umożliwia odłączenie komórek od studzienek hodowlanych.
Przenieść zawiesinę komórkową do probówek do mikrowirówek.
Odwirować probówki. Odrzucić supernatant. Ponownie zawiesić komórki w sprzężonym z fluorochromem koktajlu przeciwciał anty-makrofagowych i barwniku żywotności, Zombie-UV.
Barwnik fluorescencyjny Zombie-UV wnika do martwych komórek przez uszkodzone błony i wiąże się z białkami cytoplazmatycznymi, umożliwiając wyraźne różnicowanie od żywotnych niebarwionych komórek.
Co więcej, sprzężone fluorescencyjnie przeciwciała anty-makrofagowe wiążą się z docelowymi antygenami na makrofagach, umożliwiając zróżnicowane wykrywanie subpopulacji.
Umyj komórki, aby usunąć niezwiązane przeciwciała. Wirówka. Usunąć supernatant.
Ponownie zawiesić komórki w buforze utrwalającym w celu sieciowania białek, zachowując morfologię komórek i dezaktywując prątki w celu bezpiecznego obchodzenia się z nimi podczas analizy.
Na koniec odwirować i przet
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych