JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:27 min. • July 8th, 2025
Weźmy hodowlę komórek rakowych z fluorescencyjnie znakowanymi białkami cytoplazmatycznymi.
Dodaj indukowane cytokinami komórki zabójcze lub CIK - efektorowe limfocyty T o cechach podobnych do komórek NK - posiadające aktywność przeciwnowotworową.
Receptory D lub NKG2D grupy 2 NKG2D na komórkach CIK wiążą się z białkami indukowanymi stresem na komórkach nowotworowych.
Wiązanie indukuje komórki CIK do uwalniania toksyn cytoplazmatycznych granulek - perforyn i granzymów.
Perforyny tworzą pory w błonie komórkowej raka, umożliwiając wnikanie granzymów, które aktywują kaspazy, indukując apoptozę.
Po inkubacji zbierz komórki. Dodaj fluorescencyjny barwnik żywotności komórek wiążący kwas nukleinowy.
Barwnik dostaje się przez uszkodzoną błonę komórkową i wiąże się z DNA, w wyniku czego martwe komórki są podwójnie zabarwione.
Przy nienaruszonej błonie komórkowej żywe komórki są nieprzepuszczalne dla barwnika.
Przepuść komórki przez cytometr przepływowy, aby wykryć żywe komórki wykazujące pojedynczą fluorescencję i martwe komórki z podwójną fluorescencją.
Utwórz wykres punktowy, aby zmierzyć procent martwych komórek rakowych, określając ilościowo działanie cytotoksyczne komórek CIK.
Aby przep
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych