Barwienie komórek bakteryjnych i przygotowanie do badań immunologicznych

Zacznij od probówki zawierającej kulturę bakteryjną w fazie wykładniczej, zapewniając jednolite i aktywnie rosnące bakterie w celu uzyskania spójnych wyników.

Odwirować w celu zebrania komórek; zassać supernatant zawierający szczątki i ponownie zawiesić komórki.

Wprowadź przepuszczalny dla komórek czerwony barwnik fluorescencyjny. Cząsteczki barwnika przenikają przez błonę komórkową bakterii i docierają do nukleoidu, wiążąc się z DNA i nadając bakteriom czerwoną fluorescencję.

Odwirować w celu osadzenia barwionych bakterii i odessać niezwiązany supernatant zawierający barwnik.

Ponownie zawiesić bakterie w pożywce wzrostowej, aby utrzymać żywotność komórek.

Za pomocą fotometru zmierz absorbancję rozcieńczonej zawiesiny bakteryjnej na głębokości 600 nanometrów.

Porównaj wartość absorbancji z krzywą wzorcową, aby określić stężenie bakterii.

Przenieś żądaną objętość barwionej zawiesiny bakteryjnej do świeżej probówki zawierającej pożywkę wzrostową. Ma to na celu osiągnięcie pożądanego stężenia bakterii dla infekcji komórek gospodarza reprezentujących wielokrotność infekcji lub MOI.

Barwione bakterie z pożądanym MOI są gotowe do badań immunologicznych.

Najpierw zbierz kultury bakteryjne