JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:40 min. • July 8th, 2025
Weź komórki białaczkowe w pożywkach wzrostowych bez czynników stymulujących, takich jak cytokiny, i inkubuj je.
Brak czynników stymulujących pozwala wewnątrzkomórkowym fosforylowanym białkom na defosforylację i powrót do swoich rodzimych stanów.
Odwirować i usunąć pożywkę. Ponownie zawieś komórki w supernatance zrębu zawierającej cytokinę, limfopoetynę zrębu grasicy lub TSLP.
TSLP wiąże się ze swoim receptorem na komórce białaczkowej, wywołując dimeryzację receptora.
To zbliża do siebie dwie kinazy związane z Janusem lub JAK, ułatwiając wzajemną transfosforylację .
Aktywowane JAK fosforylują ogony cytoplazmatyczne receptora, tworząc miejsca dokowania dla przetwornika sygnału i aktywatora transkrypcji, monomerów STAT.
Po fosforylacji STAT dimeryzują i odłączają się od receptora, aby regulować dalsze procesy komórkowe.
Napraw komórki, aby utrzymać stany fosforylacji białek wewnątrzkomórkowych.
Potraktuj komórki roztworem przepuszczalności, aby zwiększyć przepuszczalność błony komórkowej.
Dodaj przeciwciała znakowane fluorescencyjnie, aby oznaczyć fosforylowane białka.
Pomiar sygnału fluorescencji metodą cytometrii przepływowej koreluje z fosforylacją STAT indukowaną przez TSLP.
Aby z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych