Wizualizacja bakterii w skrawkach biopsji pęcherza moczowego za pomocą fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 6:10 min. • July 8th, 2025
Rozpocznij od szklanego szkiełka zawierającego odparafinowany i ponownie uwodniony zakażony wycinek tkanki biopsji pęcherza moczowego zawierający bakterie uropatogenne.
Wprowadź znakowane fluorescencyjnie sondy uniwersalne - komplementarny jednoniciowy oligonukleotyd specyficzny dla konserwatywnego regionu bakteryjnego 16s rybosomalnego RNA lub 16s-rRNA.
Inkubuj szkiełko w ciemności w podwyższonej temperaturze, aby uzyskać optymalną hybrydyzację.
Podczas inkubacji sondy hybrydyzują wyłącznie z konserwatywnym regionem na bakteryjnym 16s-rRNA, nadając bakteriom zieloną fluorescencję.
Po hybrydyzacji przemyć wstępnie podgrzanym buforem, aby usunąć niezwiązane sondy.
Wybarwić wycinek tkanki barwnikiem Hoechst i znakowanymi fluoroforem markerami białek komórkowych.
Cząsteczki Hoechst wiążą się z DNA, barwiąc jądra na niebiesko, podczas gdy markery znakowane fluoroforem oddziałują z określonymi składnikami komórki, takimi jak włókna mucyny i aktyny, nadając czerwoną fluorescencję w sekcji biopsji.
Umyj szkiełko i dodaj pożywkę montażową do sekcji chusteczek.
Pod mikroskopem konfokalnym zielona fluorescencja w sekcji biopsji pęcherza moczowego z czerwoną fluorescencją potwierdza obecność
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych