JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:54 min. • July 8th, 2025
Weź zawiesinę komórek Jurkata - komórek białaczki limfocytów T.
Zmieszać podwielokrotność z barwnikiem żywotności komórek i zapewnić odpowiednią liczbę żywych komórek.
Umieść komórki w naczyniu hodowlanym i zastosuj promieniowanie ultrafioletowe C lub UVC przez wymagany czas.
UVC przenika do komórek i jest absorbowane przez DNA, tworząc fotoprodukty pirymidynowe.
Po napromieniowaniu inkubować komórki. Rozległe uszkodzenie DNA za pośrednictwem UVC inicjuje wewnętrzny szlak apoptozy, aktywując białka proapoptotyczne na zewnętrznej błonie mitochondrialnej.
Aktywowane białka oligomeryzują, tworząc pory błonowe i uwalniając cytochrom C z przestrzeni międzybłonowej do cytoplazmy.
Kompleksy cytochromu C z czynnikiem aktywującym proteazę apoptozy-1, tworząc kompleks apoptosomyczny. Apoptosom aktywuje kaspazy, powodując apoptozę.
Wprowadź znakowaną fluoroforem anektynę V, aby oznaczyć fosfatydyloserynę na błonie, marker komórek apoptotycznych, i dodaj jodek propidyny, który dostaje się przez uszkodzoną błonę, aby oznaczyć DNA.
Za pomocą cytometrii przepływowej oznacz wczesne komórki apoptotyczne znakowane apoltozą anektyną V i podwójnie barwione późne komórki apoptotyczne.
Rozpocznij od hod
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych