Analiza aktywacji bazofili w obecności testowego alergenu za pomocą cytometrii przepływowej

Pobrać probówki cytometryczne zawierające mieszaninę barwiącą zawierającą znakowane fluorescencyjnie przeciwciała monoklonalne zawieszone w buforze stymulacyjnym

.

Dodać zmniejszające się stężenia testowanego alergenu do kilku probówek. Dodaj przeciwciała anty-IgE do jednej probówki, aby służyły jako kontrola pozytywna za pośrednictwem IgE, i dodaj bufor do innej probówki w celu kontroli ujemnej.

Pobrać pipetą ludzką krew obwodową do probówek. Inkubować.

Jeśli dana osoba jest uczulona na badany alergen, ta ekspozycja powoduje, że alergen wiąże się z przeciwciałami IgE specyficznymi dla alergenu związanymi z receptorami Fc na powierzchni bazofilów.

Alergeny sieciują receptory Fc związane z IgE, powodując aktywację bazofili.

Bazofile ulegają degranulacji, uwalniając wewnątrzkomórkowe ziarnistości zawierające mediatory stanu zapalnego, z regulacją w górę cząsteczek CD63 i CD203c.

Znakowane fluorescencyjnie przeciwciała monoklonalne wiążą się odpowiednio z CD63, CD203c i CCR3 na bazofilach.

Obniż temperaturę, aby zatrzymać degranulację bazofilów.

Dodaj bufor, aby lizować erytrocyty i naprawić komórki.

Za pomocą cytometru przepływowego zidentyfikuj bazofile z populacji limfocytów.

Używaj