JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:43 min. • July 8th, 2025
Weź probówkę zawierającą świeżo pobraną ludzką krew i dodaj bufor do lizy.
Detergent w buforze przenika przez błonę komórkową, lizuje komórki i uwalnia wewnątrzkomórkowe kwasy nukleinowe lub NA i nukleazy.
Czynniki chaotropowe w buforze denaturują nukleazy, zapobiegając degradacji NA.
Dodaj cząsteczki szkła magnetycznego lub MGP - cząstki magnetyczne pokryte krzemionką - i dokładnie wymieszaj.
Niskie pH buforu protonuje krzemionkę, pozostawiając ładunek dodatni na powierzchni MGP.
Ujemnie naładowane NA wiążą się elektrostatycznie z naładowaną powierzchnią, tworząc kompleks NA-MGP.
Pod wpływem pola magnetycznego kompleksy NA-MGP gromadzą się z boku rury.
Odrzucić sklarowany osad zawierający szczątki komórkowe i białka.
Wykonać wiele etapów mycia, ponownie zawieszając kompleksy NA-MGP w buforze do mycia, stosując pole magnetyczne do zbierania kompleksów i odrzucając supernatant wraz z pozostałymi zanieczyszczeniami.
Zawiesić kompleksy w buforze elucyjnym. Wysokie pH zakłóca interakcję NA-MGP, uwalniając NA. Wymyte NA są gotowe do dalszych testów.
Aby oczyścić kwasy nukleinowe z pobranej krwi, ponownie wymieszaj zawartość probówki, obracając rurkę próżniową ręcznie od 5 do 10 razy. Wl
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych