JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 7:53 min. • July 8th, 2025
Przygotować szkiełko komorowe z podpartą dwuwarstwą lipidową lub SLB, złożoną z fosfolipidów i biotynylowanych fosfolipidów.
Dodaj białka blokujące, aby zapobiec niespecyficznym interakcjom.
Wprowadzić streptawidynę, która wiąże się z biotynylowanymi fosfolipidami.
Dodać biotynylowane, znakowane fluorescencyjnie przeciwciała anty-CD16, które wiążą się z unieruchomioną streptawidyną.
Odpipetować D-biotynę, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu streptawidyny z komórkami.
Wprowadź komórki NK lub natural killer. Receptory CD16 na tych komórkach specyficznie wiążą się z przeciwciałami anty-CD16 związanymi z SLB, tworząc synapsę immunologiczną.
To wiązanie wyzwala przegrupowanie aktyny i polaryzację mikrotubul, ostatecznie tworząc mikroklastry w centrum synapsy zawierające przeciwciała anty-CD16 związane z SLB i receptory CD16.
Granulki lityczne zawierające perforynę polaryzują i przenikają przez włókna aktyny w synapsie.
Napraw komórki. Przepuszczalność membran i SLB.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała falloidyny i antyperforyny, które wiążą się odpowiednio z filamentami aktyny i perforyną.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego o super rozdzielczości zwizualizuj rozkład flu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych