Test cytotoksyczności za pośrednictwem komórek NK Przygotowanie próbki do analizy cytometrycznej przepływowej

Zacznij od osadu komórkowego zawierającego komórki NK lub komórki NK oraz fluorescencyjnie wybarwione komórki docelowe.

Zawiesić osad w odpowiednim podłożu i inkubować.

Komórka NK oddziałuje poprzez białka adhezyjne powierzchniowe, tworząc synapsę immunologiczną z komórką docelową.

To inicjuje sygnalizację komórek NK, uwalniając cytotoksyczne granulki zawierające perforynę i granzymy do synapsy.

Perforyna, białko tworzące pory, tworzy kanały w błonie komórki docelowej, umożliwiając granzymom przedostanie się do cytoplazmy.

Granzyme, proteaza serynowa, oddziałuje z białkami wewnątrzkomórkowymi, aktywując szlak apoptozy w komórce docelowej.

Teraz dodaj barwnik fluorescencyjny jodku propidyny.

Barwnik dostaje się do martwych komórek przez ich uszkodzone błony i wiąże się z DNA poprzez interkalację między jego parami zasad.

W konsekwencji martwe komórki wyrażają podwójny fluorochrom, podczas gdy żywe komórki wyrażają pojedynczy fluorochrom.

Próbka jest gotowa do cytometrii przepływowej w celu oceny cytotoksyczności wywołanej przez komórki NK poprzez ilościowe określenie liczby martwych i żywych komórek docelowych.

Aby przygotować próbkę do badania cytotoksyczności, najpierw oznacz 1,5-