Preparat na bazie agarozy z precyzyjnie pokrojonymi ludzkimi plastrami płuc

Zacznij od wyciętego ludzkiego płuca.

Włóż silikonową rurkę do głównego oskrzela płuca. Zabezpiecz rurkę, zapewniając drogę do wprowadzenia agarozy do tkanki w kolejnych krokach.

Zacisnąć inne oskrzela i naczynia, aby zapobiec wyciekowi agarozy podczas napełniania.

Wprowadzić do płuc wstępnie ogrzaną, nisko żelującą agarozę zmieszaną z pożywką, aż do całkowitego napompowania.

Umieść płuco na lodzie w celu polimeryzacji agarozy, tworząc stałą matrycę żelową, która zapewnia stabilność tkance i utrzymuje architekturę płuc podczas zabiegów sekcji.

Po polimeryzacji pokrój tkankę płucną na jednolite płyty. Wyodrębnij cylindryczne rdzenie tkanek z płyt tkankowych.

Za pomocą krajalnicy do tkanek wypełnionej schłodzonym buforem pokrój rdzeń tkanki, aby uzyskać precyzyjnie pokrojone plastry płuc.

Przenieś plastry na płytkę hodowlaną zawierającą schłodzone podłoże. Inkubować, aby ustabilizować tkankę.

Na koniec przenieś plastry do płytki wielodołkowej zawierającej pożywkę. Przygotowane, precyzyjnie wycięte plastry płuc są teraz gotowe do eksperymentów.

Aby rozpocząć tę procedurę, należy kannuować tchawicę, wkładając silikonową rurkę i mocując ją zaciskiem równoległym do rurki, tak aby zacisk ściskał tkankę razem wzdłuż silikonowej rurki bez jej ściskania. Zamknij wszystkie inne oskrzela, naczynia krwionośne i urazy zaciskami, aby agaroza nie mogła wyciekać podczas procedury napełniania.

Do kaniulacji oskrzela głównego potrzebne są dobre umiejętności anatomiczne. Płuca nie powinny być zbyt mocno rozszerzone, w przeciwnym razie tkanka będzie się rozpraszać, a jeśli tkanka nie zostanie wystarczająco wypełniona, niemożliwe będzie wykonanie PCLS, ponieważ tkanka jest zbyt miękka.

Następnie wymieszaj równoważną objętość 3% agarozy o niskiej żelowości z pożywką hodowlaną w zlewce i wkraplaj mieszaninę do płuc za pomocą 50-mililitrowej strzykawki. Przed ponownym napełnieniem strzykawki pożywką należy zacisnąć cewnik palcami lub zaciskiem, aby uniknąć pęcherzyków powietrza i topnika wolnego od agarozy. Pokrój tkankę płucną na 3 do 5-centymetrowe płyty.

Napełnij krajalnicę do chusteczek 400 mililitrami lodowatego EBSS. Natychmiast wytnij cylindryczne rdzenie tkanek z płyt płuc za pomocą półautomatycznego śrubokręta z narzędziem do wiercenia. Następnie przenieś rdzenie tkanek do uchwytu na tkanki krajalnicy do tkanek. Umieść ciężarek na rdzeniu tkanki i zacznij kroić rdzeń tkanki na PCLS. Pożywkę należy odsączyć z krajalnicy do tkanek do zlewki, otwierając zacisk szklanego cylindra.

Następnie przenieś plastry ze zlewki na szalkę Petriego z pożywką hodowlaną. Następnie umieść szalkę Petriego w inkubatorze i pozwól pożywce się rozgrzać przed etapami mycia. Następnie ostrożnie przenieś wycinki płuc na 24-dołkową płytkę hodowlaną z co najmniej 500 mikrolitrami pożywki hodowlanej na dwa plastry na dołek.