JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:10 min. • July 8th, 2025
Weźmy płytkę wielodołkową zawierającą precyzyjnie wycięte ludzkie plastry płuc, które utrzymują natywną mikroarchitekturę płuc.
Usuń nośnik. Dodać do studzienek zwiększające stężenie badanego czynnika i przeprowadzić inkubację.
W zależności od swojego potencjału cytotoksycznego, badany czynnik rozrywa błony komórkowe, wywołując śmierć komórki i redukując żywotne komórki w obrębie plastrów.
Po inkubacji usuń pożywkę. Zanurz plastry w pożywce zawierającej rozpuszczalną w wodzie sól tetrazolową lub WST-1 i odczynnik do sprzęgania elektronów.
Inkubować. W komórkach aktywnych metabolicznie system transportu elektronów błony plazmatycznej przenosi elektrony z wewnątrzkomórkowego NADH do zewnątrzkomórkowego odczynnika sprzęgania elektronów, redukując nieprzepuszczalny dla komórek barwnik WST-1 do stabilnego, ciemnożółtego, rozpuszczalnego w wodzie formazanu.
Po inkubacji wstrząsnąć płytką, aby równomiernie rozprowadzić formazan i przenieść go do płytki wielodołkowej.
Za pomocą czytnika mikropłytek zmierzyć absorbancję formazanu, wskazującą na żywotność tkanki.
Spadek absorbancji formazanu, zależny od stężenia badanego czynnika, wskazuje na zmniejszoną żywotność plastra płuc, potwierdzając
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych